一、选型前必须核准的 4 大核心参数门槛
做定量 ELISA 或更换试剂盒品牌时，如果标曲线性差、复孔漂移大，未必是移液手艺问题，往往在选型阶段就已经埋下隐患。以下是必须在产品说明书中核验的 4 项底线指标：
| 核心参数 | 技术指标底线 | 说明书核对位置 | 常见踩坑与操作建议 |
|---|---|---|---|
| 01 / 灵敏度 LOD | < 10 pg/mL（低丰度因子） | Sensitivity / Limit of Detection | 估算样本预期浓度下限，选 LOD 比它低一个量级的盒子，只标"高灵敏度"无数值者慎选。 |
| 02 / 特异性与交叉率 | 同源蛋白交叉反应 < 1% | Cross-reactivity 表 + Reactivity 种属栏 | 测 IL-1β 必须核对与 IL-1α 的交叉；说明书未列的种属严禁随意推测，必须确认实测数据。 |
| 03 / 精密度 CV | 批内 CV < 10%，批间 CV < 15% | Precision (Intra-assay & Inter-assay) | 厂家常标注最优浓度点的成绩，靠近 LOD 点会更高；跨批次纵向课题务必提前锁同一批号。 |
| 04 / 样本类型适配 | 说明书明确验证真实基质 | Sample Types 栏 | 常规验证涵盖血清/血浆/组织匀浆；溶血、脂血、高 BSA 培养基会产生明显基质效应，非常规样本须先做加标回收预实验。 |
二、Part A｜下单前核对清单（6 项门槛，缺一项不买）
参考 Abcam 官方买家指南及行业质控规范，采购前请逐项对照以下 6 项标准：
| # | 核对项 | 判定标准 | 在说明书哪里查 | 不达标怎么办 |
|---|---|---|---|---|
| 1 | 最低检测限 LOD | 低于样本预期浓度下限；低丰度细胞因子建议 LOD < 10 pg/mL | 「Sensitivity」「LOD」，核对单位是 pg/mL 还是 ng/mL | 只写"高灵敏度"不标数值的谨慎；更换更高灵敏度型号 |
| 2 | 动态范围 / 线性范围 | 样本预期浓度落在范围的中间 1/3，避免贴在两端 | 「Range」「Standard Curve」图表 | 超出范围提前准备稀释方案，或选择宽范围试剂盒 |
| 3 | 特异性 / 交叉反应率 | 同源家族蛋白交叉反应 < 1%；种属必须一致 | 「Specificity」「Cross-reactivity」 | 说明书没写的种属不赌，要求供货商提供验证数据或预实验 |
| 4 | 精密度 CV | 批内 CV < 10%；批间 CV < 15% | 「Precision」性能表 | 做长期纵向课题，CV > 15% 的批次间数据不可比，务必锁定同一批号备足 |
| 5 | 回收率 + 稀释线性 | 回收率 85%–115%；稀释线性偏差 ≤ 15% | 「Recovery」「Linearity of Dilution」 | 仅在纯缓冲液测定不算数，必须在真实样本基质中验证过 |
| 6 | 样本类型与效期 | 覆盖你的样本类型；收货时剩余有效期 ≥ 6 个月 | 「Sample Types」「Expiry Date」 | 样本量少优先选 48T 或可拆板条；临期货源坚决拒收 |
三、Part B｜采购四要素选型模板（直接复制发给供货商）
为避免买错规格或沟通反复，请将以下选型要素填好后发送给产品专员，由专业工程师按参数反向推荐匹配型号：
【靶标名称】 例：Human IL-6
【样本种属】 例：人 / 小鼠 / 大鼠
【样本类型】 例：血清 / EDTA血浆 / 细胞上清 / 组织匀浆
【预期浓度】 例：预计 10–100 pg/mL（或注明"未知，需预实验"）
【实验样本】 例：40 个样本 × 双复孔
【实验目的】 □ 定量发文章 □ 预实验探索 □ 定性筛查
【特殊要求】 □ 需同一批号 □ 需附原厂质检报告(COA) □ 货期要求 __ 天内四、Part C｜翻车排雷对照表（常见症状与排查解法）
| 实验症状 | 最可能的原因 | 立即验证方法 | 解决方案 |
|---|---|---|---|
| 标曲线性差、R² < 0.99 | 标准品倍比稀释未充分混匀；稀释梯度算错；标准品反复冻融 | 看复孔 OD 是否漂移；重跑一份新鲜标准品 | 稀释后充分涡旋并静置；严格按说明书梯度操作；标准品分装冻存现配现用 |
| 复孔差异大、CV 偏高 | 加样体积偏差（未润洗、带气泡、枪头不垂直）；孔内孵育时间不均 | 同一样本跑 8 个复孔计算移液 CV | 加样前润洗枪头 3 次，垂直慢推；加样控制在 10 分钟内完成，优先用多道排枪 |
| 空白孔也显色 | 洗板不彻底残留酶标抗体；枪头或底物交叉污染；TMB 见光变质 | 单独测试一份新鲜显色底物 | 洗板后在吸水纸上拍干残液；一次性耗材严禁复用；TMB 避光操作，倒出的试剂绝不倒回 |
| 整体信号偏低 | 试剂盒反复冻融导致抗体降解；工作液久置；试剂加错顺序 | 检查阳性对照 OD 是否达到说明书要求 | 严格 2–8℃ 避光储存；工作液现配现用；加样前核对试剂标签顺序 |
| 高浓度样本信号反而低 | 钩状效应（Hook Effect）：抗原浓度过高，双抗体夹心饱和 | 将样本作 1:10、1:100 梯度稀释后重测 | 确定最佳线性稀释倍数，并在最终报告中折算稀释倍数 |
| 回收率偏低 / 稀释非线性 | 基质效应：溶血、脂血、高蛋白基质成分干扰抗原抗体结合 | 制作加标回收预实验对照组 | 改用说明书推荐的样本稀释液进行预稀释；剔除溶血脂血样本 |